Mechlppdk基因在木薯中的表达分析及RNA干扰载体构建和遗传转化
Chinese Agricultural Science Bulletin（2021）
摘要
本研究为了明确丙酮酸磷酸双激酶(ppdk)在木薯中的表达谱,创制Mechlppdk的干扰株系,以期为Mechlppdk的功能研究提供材料.本研究以栽培型木薯Arg7为材料,用qPCR的方法分析Mechlppdk在木薯根、茎、叶中的表达谱;采用RNA干扰的方法,构建Mechlppdk的干扰载体,并遗传转化木薯脆性愈伤,经木薯再生体系获得转基因苗,在添加抗生素的培养基上进行生根筛选,经PCR鉴定获得Mechlppdk的干扰株系.用qPCR的方法鉴定Mechlppdk在干扰株系的表达情况.结果 表明,Mechlppdk在木薯叶片中表达量最高,达到管家基因的50％.在Mechlppdk的转运肽区,选取1个保守区段设计引物,构建RNA干扰表达载体pART27-echlppdki,将表达载体转化农杆菌LBA4404,侵染木薯脆性胚愈伤,获得阳性转基因木薯苗7个株系.通过qPCR分析发现各株系Mechlppdk转录本有不同程度的降低.通过以上分析表明本研究获得了干扰效率较高木薯Mechlppdk干扰株系,将为解析木薯Mechlppdk的功能提供研究材料.
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